革兰氏阳性食源性致病菌--单核增生李斯特菌是世界范围内一个重要的公共卫生和食品安全问题。孕妇、婴儿、老年人和免疫抑制个体感染这种致病菌可导致严重的疾病和相对较高的死亡率。感染途径与奶酪、肉类、牛奶、蔬菜和鱼等食物有关。因此，从各种食品中分离单核增生李斯特菌的有效方法对保证食品的质量和安全具有重要意义。

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      Development of a Novel Selective and Differential Medium for the Isolation of Listeria monocytogenes

内容

摘要

认识到目前使用的选择性培养基局限性，作者希望在保持成本效益的同时，开发一种能提高特异性的替代培养基。本研究的目的是开发一种新的选择性和特异性培养基来检测单核增生李斯特菌(含卵磷脂和左氧氟沙星培养基-LL培养基)。通过分别采用纯培养物和食品样品进行试验，并与常规MOX培养基和两种显色培养基比较其特异性和灵敏度。

结果与讨论

试验细菌在含有不同浓度左氧氟沙星的基础培养基上的生长

为了确定抗生素的最佳浓度，作者测试了细菌在含有四种不同浓度左氧氟沙星的基础培养基上的生长情况。在制备的基础培养基中添加左氧氟沙星（浓度为：0.10mg/L、0.15mg/L、0.20mg/L、0.25mg/L）。

单核细胞增生李斯特菌在MOX培养基和LL培养基上回收情况

LL培养基上的细菌计数与MOX培养基上的细菌计数差异无统计学意义(P > 0.05)。在MOX和LL培养基上，培养24小时后菌落并不总是具有典型外观。在48小时，所有单核细胞增生李斯特菌菌株在这些培养基上形成正确的形态(分别为黑色带黑色晕圈和白色带晕圈)。

LL培养基的性能评价

所有测试的单核细胞增生李斯特菌菌株在每种测试培养基上产生典型的单核细胞增生李斯特菌菌落。.Brillience李斯特琼脂和LL培养基的排他性最好。

使用加标和未加标食物样本评估LL培养基的特异性和敏感性

Table 3 介绍了未加标食物样本的细菌学分析结果。阴性样本的数量等于食物样本总数，Brilliance李斯特琼脂、李斯特菌显色培养基和LL培养基的特异性分别为96.5%、94.5%和96.0%。除MOX培养基外，LL培养基和两种显色特异性无显著差异

Table 4表示，在50份加标食品样品中，李斯特显色培养基和LL培养基的灵敏度最高，其次是Brilliance李斯特菌(92.0%)和MOX(54.0%)。

讨论

美国FDA推荐的从食品中分离单核细胞增生李斯特菌的方法，样品在李斯特增菌缓冲肉汤中进行选择性前增菌培养，然后在选择性和差异培养基(如PALCAM、Ox- ford、MOX和李斯特显色培养基)上进行平板培养。但是，检测李斯特菌属利用的七叶皂苷酶活性（如：PALCAM、牛津琼脂和MOX），无法区分单核细胞增生李斯特菌与其他李斯特菌属。此外，几种使用有色化合物的显色介质，如5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃葡萄糖苷和L-α-磷脂酰肌醇，价格昂贵。使用显色培养基检测单核细胞增生李斯特菌通常涉及由李斯特菌属产生的β-D-葡萄糖苷酶裂解底物5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃葡萄糖苷，结合L-α-磷脂酰肌醇用于检测磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C (PI-PLC)和磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C (PC-PLC)。

Oxoid chromogenic Listeria agar (OCLA)含有大豆卵磷脂而不是磷脂酰肌醇，用于区分单核细胞增生李斯特菌与其他李斯特菌属。结果表明，大豆卵磷脂是磷脂酰肌醇的合适替代品。大豆卵磷脂是一种廉价且易得的产品，可用于检测PI-PLC和PC-PLC的活性。本研究中，LL培养基含有大豆卵磷脂，用于区分单核细胞增生李斯特菌与其他李斯特菌。LL培养基具有更高的特异性和敏感性。与选择性培养基比较，更好的区分单增李斯特菌与伊氏李斯特、英诺克李斯特。与显色培养基比较，除价格优势外，LL培养基还能抑制PI-PLC和PC-PLC阳性细菌如蜡样芽胞杆菌和葡萄球菌的生长。

综合以上数据可知，本研究中的LL培养基比MOX具有更高的特异性和敏感性。尤其，LL可轻松区分单核细胞增生性李斯特菌、伊氏李斯特和英诺克李斯特，后者在常规PALCAM、牛津琼脂和MOX上经常产生假阳性结果。此外，LL培养基对Brilliance琼脂和科玛嘉表现出相似的特异性和敏感性，且成本降低。LL培养基还能抑制PI-PLC和PC-PLC阳性细菌如蜡样芽胞杆菌和葡萄球菌的生长，这些菌在一些显色培养基上引起假阳性。由于LL培养基的良好特异性，可减少对菌落进行一步确认试验的工作和时间。LL培养基的成本效益将使其适合常规实验室使用。虽然需要进一步的研究来评估更多李斯特菌在LL培养基上的生长情况，但LL培养基可能为食品中单核增生李斯特菌的检测提供了一种有价值的选择性培养基。