产品介绍:

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品名:革兰氏染色液试剂盒

试剂盒组成:

1.结晶紫染色液:5ml×1支

2.碘液:5ml×1支

3.脱色液:5ml×2支

4.沙黄复染液:5ml×1支

原理:

通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇或丙酮脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色。

操作方法:

1.准备好革兰氏染色所需试剂、玻片、吸水纸、镊子、接种环、废液缸、洗瓶、去离子水、酒精灯等,待检测的菌株一般应为新鲜培养物;

2.以酒精擦拭玻片,在酒精灯上干燥后,用接种环挑取一环灭菌的去离子水或生理盐水到载玻片上,挑取少量纯培养物在水滴上涂抹至均匀分散,将涂片在酒精灯火焰上灭活、固定;

3.加结晶紫溶液1-2滴,染色1分钟,用去离子水轻轻从培养物上方流过水洗;

4.待干,加革兰氏碘液,作用1分钟,用去离子水轻轻从培养物上方流过水洗;

5.加脱色液(95%酒精),不时摇动玻片,直至无紫色脱落为止(约10-20秒),用去离子水轻轻从培养物上方流过水洗;

6.待干,加复染液,复染30秒。用去离子水轻轻从培养物上方流过水洗,待玻片干燥后镜检;

7.油镜镜检。菌体呈紫色者为革兰氏阳性菌;呈红色者为革兰氏阴性菌。

注意事项:

1.培养物要新鲜,以免对结果的判断造成影响;

2.酒精洗脱为关键步骤,不可长时间洗脱,以免对结果判断造成影响;

3.碘液容易挥发,平时应拧紧瓶盖、避光保存;

4.涂片可采用自然风干、干燥箱等方法进行干燥;

5.每一步水洗时,注意不要直接对着涂片冲洗,水流应从上方流经涂片,轻轻水洗。