蜡样芽胞杆菌平板计数法样品处理

2016-09-08 12:17:46 admin

样品处理

冷冻样品应在45 ℃以下不超过15 min 或在2 ℃~5 ℃不超过18 h 解冻,

若不能及时检验,应放于-10℃ ~ -20℃保存;非冷冻而易腐的样品应尽可能及时检验,若不能及时检验,应置于2 ℃~5 ℃冰箱保存,24 h 内检验。

样品制备

称取样品25 g,放入盛有225 mL PBS 或生理盐水的无菌均质杯内,用旋转刀片式均质器以8000 r/min~10000 r/min 均质1 min~2 min,或放入盛有225 mLPBS 或生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1 min~2 min。若样品为液态,吸取25 mL 样品至盛有225 mL PBS 或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中,振荡混匀,作为1:10 的样品匀液。

样品的稀释

吸取上述1:10 的样品匀液1 mL 加到装有9 mL PBS 或生理盐水的稀释管中,充分混匀制成1:100 的样品匀液。据对样品污染状况的估计,按上述操作,依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1 次,换用1 支1mL 无菌吸管或吸头。

样品接种

根据对样品污染状况的估计,选择2 个~3 个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),以0.3 mL、0.3 mL、0.4 mL 接种量分别入三块MYP 琼脂平板,然后用无菌L 棒涂布整个平板,注意不要触及平板边缘。使用前,如MYP琼脂平板表面有水珠,可放在25 ℃~50 ℃的培养箱里干燥,直到平板表面的水珠消失。